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BAC文库构建的技术支持

BAC文库构建的技术支持:
 
 材料

  缓冲液和溶液
   - 碱裂解液I , 4°C
    50 mM 葡萄糖
    25 mM Tris-Cl (pH 8.0)
    10 mM EDTA (pH 8.0)
    配制碱裂解液I 约100ml,灭菌,保存在四度。
   - 碱裂解液II,新鲜配置,室温保存
    0.2 N NaOH (从10N的NaOH新鲜制备)
    1% (w/v) SDS
    碱裂解液II应该新鲜配制,室温保存。
   - 碱裂解液III, 4°C
    5M 醋酸钾,60ml
    冰醋酸,11.5ml
    SDW,28.5ml
   - 酒精
   - 70%酒精
   - 异丙醇
   - 酚:氯仿(1:1, v/v)
   - 醋酸钠 (3M,pH5.2)
   - STE,4°C
    10 mM Tris-Cl (pH 8.0)
    0.1 M NaCl
    1 mM EDTA (pH 8.0)
   - TE (pH 8.0)
    10 mM Tris-Cl (pH 8.0)
    10 mM EDTA (pH 8.0)
 载体与菌株
    BAC转化的大肠杆菌
 培养基和抗生素
    含12.5μg/ml氯霉素的LB平板和液体培养基
 酶和缓冲液
    溶菌酶
    RNaseA,不含DNase
    限制性内切酶和相应缓冲液
 核苷酸/寡核苷酸
    用于脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis)的DNA标准参照物
 凝胶/点样缓冲液
    脉冲场凝胶电泳(Pulsed-field gels,或者0.5%琼脂糖凝胶)
 离心机/转头/离心管
  其他
    37摄氏度摇床

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