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技术资料---cDNA文库构建

技术简介:
    cDNA文库是以特定的组织或细胞mRNA为模板,逆转录形成的互补DNA(cDNA)与适当的载体(常用噬菌体或质粒载体)连接后转化受体菌形成重组DNA克隆群,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织或细胞的cDNA文库。cDNA文库特异地反映某种组织或细胞中,在特定发育阶段表达的蛋白质的编码基因,因此cDNA文库具有组织或细胞特异性。cDNA文库比基因组DNA文库小得多,能够比较容易从中筛选克隆得到细胞或组织特异表达的基因。cDNA文库在研究具体某类特定细胞中基因组的表达状态及表达基因的功能鉴定方便具有特殊的优势,从而使它在个体发育、细胞分化、细胞周期调控、细胞衰老和死亡调控等生命现象的研究中具有更为广泛的应用价值,是研究工作中最常使用到的基因文库。
经典cDNA文库构建的基本原理:
    用Oligo(dT)作逆转录引物,或者用随机引物,给所合成的cDNA 加上适当的连接接头,连接到适当的载体中获得cDNA文库。其基本步骤包括:(1) mRNA 的提取。获取高质量的mRNA是构建高质量的 cDNA 文库的关键步骤之一。(2)cDNA第一条链的合成。(3)cDNA第二条链的合成。(4))双链cDNA的修饰。(5)双链cDNA的分子克隆。(6)cDNA文库的扩增。(7)cDNA 文库鉴定评价。
 
 

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