Real Time PCR技术即是在PCR反应体系中加入荧光物质，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，对未知模板进行定量分析的方法。因其无需电泳，且具有快速性及定量性而倍受青睐。本公司承接利用Real Time PCR法进行课题研究的技术服务，可从引物设计合成开始，至Real Time PCR反应检测的一条龙技术服务，欢迎惠顾！

 

 

SYBR^® Green I嵌合荧光法，TaqMan^®探针法，Cycling探针法。

 

使用本公司Thermal Cycler Dice^® Real Time System和美国Cepheid公司的Smart Cycler^® II System为主的多种 Real Time PCR装置。

 

 

PCR反应结束后的PCR产物无需电泳检测，可以通过Real Time PCR方法，简单快速地对目的基因进行高特异性、高灵敏度的检测，同时闭管操作的实时检测可以有效防止反应产物的污染。本技术可以广泛应用于病毒、病原菌等致病微生物的检测以及各种生物品种的鉴定等。

 

绝对定量首先必须构建与检测样品目的基因具有相同序列的标准品。使用已知浓度的标准品制作5 个点以上的标准曲线后，可以使用标准曲线对未知浓度的检测样品进行绝对量(起始拷贝数)分析。

 

SNP(single nucleotide polymophism) 即单核苷酸多态，在人类基因组中广泛存在，平均每1000 个碱基对中就有1个多态位点。本公司主要采用Cycleave PCR法，使用不同的荧光物质分别标记野生型和突变型探针，进行双通道同步检测，对每个检测样品SNP位点进行分型解析。

 

基因表达的研究一般采用相对定量的方法。相对定量法必须对样品的目的基因和参比基因同时分别进行定量，然后求出在参比基因校正下目的基因的校对值。通过对样品间目的基因的校对值进行比较，可以对不同样品间的mRNA进行表达量分析。参比基因通常选用表达量相对恒定的Housekeeping Gene， 如：GAPDH、β-actin等。通过同时对参比基因的实时检测，可以对样品之间由于起始细胞数不同或RNA提取效率的不同等造成的RNA量误差进行校正，达到在严格意义上对样品之间的mRNA表达量进行分析之目的。

 

 

◇ 如果您需要进行此项服务,请填写“ Real Time PCR 检测技术服务委托单”。填写后通过传真或E-mail发送给我们或当地代理商。
◇ 进行mRNA表达量分析时，如果提供的材料为Total RNA，请寄 送足量的并且保证纯度的Total RNA(浓度在500 ng/μl以上，体积在20 μl以上)。如果目的基因表达量低时，应尽量提供更高浓度的Total RNA。
◇ 如果提供的材料为细胞或组织，DNA、RNA的提取费用另收。 同时应保证材料新鲜，动物细胞数为10⁶以上，动物组织为100 mg以上。

 

 

具体情况请参见本刊“Real Time PCR用引物设计合成服务”部分内容。

 

使用设计合成的引物，以客户提供的Total RNA样品为模板，进行Real Time PCR反应，确认引物模板的反应性能。然后将模板进行5个浓度梯度稀释，制作标准曲线，以供进一步定量分析使用。

 

对客户提供的RNA Sample，进行Real Time RT-PCR反应，并进行定量分析。用相对定量方法进行定量分析时，要对管家基因等参比基因进行同样操作，用所得到的值进行RNA量的校正，最后求得目的基因的相对表达量。

 

 

 

◇ 以上技术服务报价是针对采用SYBR Green I 嵌合荧光法的报 价。如果采用TaqMan探针或Cycling探针方法时，相应的探针合成费用另计，具体价格请垂询!
◇ 以上技术服务报价是以提纯的核酸(即：DNA或RNA)为起始材料设定的，如果需要进行核酸纯化时，费用另计。
◇ 相对定量检测时，若客户要求构建RNA标准品或因客户提供的Total RNA不能作为标准品时，构建RNA标准品的费用另计。具体价格请垂询！
◇ 以上技术服务报价为1个目的基因的报价。进行相对定量分析时同一材料的2个目的基因的价格=1个目的基因价格×1.5；3个目的基因的价格=1个目的基因价格×2。
◇ 如因实验材料等非本公司原因造成某实验步骤失败，使实验提前终止，已启动的实验项目仍正常收费。
＊一般情况下，检测样品数为20个以下时，交货期为3周； 检测样品数为20个以上时，具体交货期请垂询！
若遇特殊原因，如因实验材料原因，Total RNA需要重新提取； 基因表达量较低，需要构建标准品等情况，交货期会有所延长。