细菌的DNA克隆是把外源基因与克隆载体进行体外连接，继而转化宿主细胞，筛选出含有目的基因重组质粒的转化子，并将该转化子大量扩增提取重组质粒的过程。

 

◇ PCR产物TA克隆
使用Ex Taq或LA Taq等聚合酶扩增的PCR产物3′ 末端带有一个“A”尾，可直接克隆至带有“T”末端的载体上 (如 pMD19 -T Vector等)。
◇ 目的基因亚克隆
将含有目的基因的质粒采用酶切方法克隆至商品化的表达载体或改造后的特殊载体上。
◇ 以质粒为模板PCR扩增目的基因后克隆
将质粒上的一段序列通过PCR加入酶切位点或将几个不同来源的片段通过PCR拼接后进行克隆。
◇ In-Fusion PCR克隆
使用Clontech公司独创的In-Fusion克隆技术，可以通过同源重组，不需要加入连接酶，将PCR产物克隆至所需载体。特别适用于扩增片段内含有克隆所用限制性酶切位点，酶切方法无法克隆的情况。

 

1. 公司可以免费提供TA克隆载体(载体种类及信息详见本网站：“Vectors、Primers“产品部分)及pUC、pBluescript系列载体，除此以外的所有亚克隆载体请您自己提供。
2. TA克隆实验，PCR产物的量不少于1 μg。我们在收到样品后，先进行回收纯化，然后进行一个测序反应，在测序结果与您提供的参考序列一致后开始克隆实验。
3. 目的基因亚克隆实验，请提供含有目的基因的质粒及亚克隆载体质粒(均不少于2 ug)，如果质粒量少，我们需要额外收取转化费用。我们在收到样品后，先进行预实验检测，检测结果与背景资料一致后开始实验。
4. 以质粒为模板进行PCR扩增目的基因实验，不保证扩增的结果与参考序列完全一致。
5. 设计PCR扩增引物时需引入和载体同源的15个碱基，所以使用In-Fusion技术进行克隆时需提供克隆载体的序列。

 

注：
以上实验费用及周期是针对DNA片段长度小于2 kbp的情况制定的，若 DNA片段长度超过2 kbp或克隆后需要进行测序时，具体价格及实验周期请垂询。

 

实验报告(包括具体实验步骤、照片等)、测序彩色波形图、测序方向图、序列碱基图、酶切位点图、保存电子版结果的CD光盘、克隆构建的质粒及含有该质粒的穿刺菌保。