测序样品的提供 测序样品的提供 ■ 质粒DNA的测序 ◇ Sample形态为提纯质粒时 请注明载体名称及结构情况、插入片段的长度及插入片段的酶切位点等情况，请提供3 ~ 5 μg提纯的质粒DNA (浓度大于200 ng/μl)。如果提供质粒偏少需要公司转化时，收取质粒转化费用。 ■ PCR产物直接测序 ◇ Sample形态为纯化后的PCR产物时 请提供切胶回收纯化后的PCR产物1 ~ 3 μg (浓度大于100 ng/μl), 并请提供浓度 (浓度须正确) 大于3.2 pmol/μl的测序引物20 μl以上。此外，请注明PCR产物的长度、引物的具体序列等情况。 ◇ Sample形态为未纯化的PCR产物时 请提供5 ~ 20 μg的粗PCR产物, 我们负责纯化测序 (收取纯化费)。同时请提供浓度 (浓度须正确) 大于3.2 pmol/μl的测序引物20 μl以上, 并请注明PCR产物的长度、引物的具体序列等情况。 ◇ Sample形态为PCR模板DNA时 请提供适量的模板DNA及用于PCR的引物 (浓度大于3.2 pmol/μl约100 μl)。本公司负责PCR反应和PCR产物的纯化及测序 (需收取PCR反应费及PCR产物的纯化费) 。此外，请注明PCR产物的长度及引物的具体序列等情况。 ◇ 注意事项 1. PCR产物直接测序成功的关键是PCR产物的纯度，所以我们提倡切胶回收PCR产物。如果有几条PCR产物长度相近，用电泳胶也无法分开，此时的PCR产物便无法直接测序。这种情况建议把PCR产物克隆后测序。 2. PCR产物直接测序成功的另一要因是引物，不是能做PCR反应的引物便能测序。测序用引物要求较高,引物的3′端必须与模板完全匹配，含有Mix碱基的引物一般不能测序 (特别是3′端)。此外，测序引物长度一般为20个碱基左右，GC含量必须在50 ~ 60%左右。而且，用于测序的引物一定要纯，纯度必须大于90%。 3. 在PCR扩增时，难以扩增（扩增后的PCR带较弱）的PCR产物在测序时一般成功率较低。 4. 小于150 bp的PCR产物直接测序效果不好，请克隆后测序。   ■ Cosmid、Fosmid中插入DNA片段的测序 请提供纯化后的DNA 大于5 μg (因每个反应的用量需 1 μg 以上)。DNA 必须注明浓度，并请提供浓度 (浓度须正确) 大于5 pmol/μl 的引物10 μl 以上。此时每个反应的收费标准为 100 元。   ■ 其他说明 客户在提供测序样品的同时，请注明用何种引物，测几个反应，是否测通，是单链测序 (Single strand reading)，还是双链测序(Double strands reading) 等。