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测序样品的提供

测序样品的提供

■ 质粒DNA的测序
◇ Sample形态为提纯质粒时
请注明载体名称及结构情况、插入片段的长度及插入片段的酶切位点等情况,请提供3 ~ 5 μg提纯的质粒DNA (浓度大于200 ng/μl)。如果提供质粒偏少需要公司转化时,收取质粒转化费用。
■ PCR产物直接测序
◇ Sample形态为纯化后的PCR产物时
请提供切胶回收纯化后的PCR产物1 ~ 3 μg (浓度大于100 ng/μl), 并请提供浓度 (浓度须正确) 大于3.2 pmol/μl的测序引物20 μl以上。此外,请注明PCR产物的长度、引物的具体序列等情况。
◇ Sample形态为未纯化的PCR产物时
请提供5 ~ 20 μg的粗PCR产物, 我们负责纯化测序 (收取纯化费)。同时请提供浓度 (浓度须正确) 大于3.2 pmol/μl的测序引物20 μl以上, 并请注明PCR产物的长度、引物的具体序列等情况。
◇ Sample形态为PCR模板DNA时
请提供适量的模板DNA及用于PCR的引物 (浓度大于3.2 pmol/μl约100 μl)。本公司负责PCR反应和PCR产物的纯化及测序 (需收取PCR反应费及PCR产物的纯化费) 。此外,请注明PCR产物的长度及引物的具体序列等情况。
◇ 注意事项
1. PCR产物直接测序成功的关键是PCR产物的纯度,所以我们提倡切胶回收PCR产物。如果有几条PCR产物长度相近,用电泳胶也无法分开,此时的PCR产物便无法直接测序。这种情况建议把PCR产物克隆后测序。
2. PCR产物直接测序成功的另一要因是引物,不是能做PCR反应的引物便能测序。测序用引物要求较高,引物的3′端必须与模板完全匹配,含有Mix碱基的引物一般不能测序 (特别是3′端)。此外,测序引物长度一般为20个碱基左右,GC含量必须在50 ~ 60%左右。而且,用于测序的引物一定要纯,纯度必须大于90%。
3. 在PCR扩增时,难以扩增(扩增后的PCR带较弱)的PCR产物在测序时一般成功率较低。
4. 小于150 bp的PCR产物直接测序效果不好,请克隆后测序。
 
■ Cosmid、Fosmid中插入DNA片段的测序
请提供纯化后的DNA 大于5 μg (因每个反应的用量需 1 μg 以上)。DNA 必须注明浓度,并请提供浓度 (浓度须正确) 大于5 pmol/μl 的引物10 μl 以上。此时每个反应的收费标准为 100 元。
 
■ 其他说明
客户在提供测序样品的同时,请注明用何种引物,测几个反应,是否测通,是单链测序 (Single strand reading),还是双链测序(Double strands reading) 等。

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